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90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)ELISA检测试剂盒
90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)ELISA检测试剂盒图片
产品关键词
ELISA Kit for Heat Shock Protein 90kDa Alpha A1 (HSP90aA1)
产品介绍

物种

Homo sapiens (Human,人), Mus musculus (Mouse,小鼠), Rattus norvegicus (Rat,大鼠)

实验方法

双抗夹心

反应时长

3h

检测范围

1.56-100ng/mL

灵敏度

最小可检测剂量小于等于0.65ng/mL.

样本类型

血清, 血浆, 组织匀浆, 细胞裂解液, 细胞培养上清和其他生物标本

特异性

本试剂盒对检测90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)具有较高的灵敏度。
经检测人、小鼠、大鼠之间有100%的交叉反映。

回收率

分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)(加标样品),重复测定并计算其均值,回收率为测定值与理论值的比率。

样本回收率范围(%)平均回收率(%)
serum(n=5)87-9491
EDTA plasma(n=5)78-9685
heparin plasma(n=5)79-9678

精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批内差:取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差:选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定8次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批内差: CV<10%
批间差: CV<12%

线性

在定值血清及血浆样本内加入适量的90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1),并倍比稀释成1:2,1:4,1:8,1:16的待测样本,线性范围即为稀释后样本中90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)含量的测定值与理论值的比率。

样本1:21:41:81:16
serum(n=5)84-92%95-103%90-98%81-89%
EDTA plasma(n=5)90-101%86-102%93-101%99-105%
heparin plasma(n=5)89-101%94-102%87-103%85-97%

稳定性

经测定,试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

实验流程

1、实验前标准品、试剂及样本的准备;
2、加样(标准品及样本)100µL,37℃孵育1小时;
3、吸弃,加检测溶液A100µL,37℃孵育1小时;
4、洗板3次;
5、加检测溶液B100µL,37℃孵育30分钟;
6、洗板5次;
7、加TMB底物90µL,37℃孵育10-20分钟;
8、加终止液50µL,立即450nm读数。

实验原理

将90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)与连接于固相载体上的抗体结合,然后加入生物素化的90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)抗体,将未结合的生物素化抗体洗净后,加入HRP标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。

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